载体构建与菌株活化根据实验需求构建植物表达载体，将目的基因、特异性启动子、终止子、抗性筛选标记（潮抗性、草铵抗性为水稻常用筛选标记）插入二元载体T-DNA区域，测序验证序列无误后，将重组载体导入EHA105等农杆菌感受态细胞，筛选阳性单菌落，活化备用。2.水稻愈伤组织诱导选取饱满无破损的水稻成熟种子，去除外壳，经过酒精、次梯度无菌消毒后，接种于愈伤诱导培养基。26–28℃避光暗培养2–3周，诱导种子盾片产生淡黄色、颗粒状、致密的胚性愈伤组织，剔除褐化、水渍化的无效愈伤，挑选胚性愈伤作为转化受体。其他辅助转化技术PEG介导原生质体转化法：通过PEG试剂诱导外源DNA与水稻原生质体融合，多用于瞬时表达实验、蛋白亚细胞定位、基因互作验证，无法获得稳定遗传植株。花粉管通道法：利用水稻授粉后花粉管通道未愈合的窗口期，直接滴加外源质粒DNA，操作简单、无需组培，但转化效率极低、重复性差，仅用于简易种质创制。三、水稻基因转化完整操作流程以科研常用、体系成熟的农杆菌介导水稻成熟种子愈伤转化体系为例，番茄组培，标准化流程分为载体构建、愈伤诱导、侵染共培养、筛选再生、炼苗移栽、分子鉴定六大步骤。植株分化与生根培养将阳性胚性愈伤转入分化培养基，光照条件下培养，诱导芽体分化、幼苗生长；待幼苗长至3–5cm、具备完整茎叶结构后，转入生根培养基诱导根系生长，培系发达、长势健壮的完整组培苗。炼苗移栽与分子鉴定打开组培瓶封口膜，室内炼苗3–5天，适应外界温湿度环境后，清洗根部培养基残渣，移栽至温室大田培养，获得T0代植株。提取植株基因组DNA，通过PCR、荧光定量PCR、Southern杂交鉴定外源基因整合与表达情况；收获T1及后代种子，连续自交筛选，获得遗传稳定的纯合株系。番茄组培-贝科新肽(推荐商家)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司拥有很好的服务与产品，不断地受到新老用户及业内人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员，点击页面的商盟客服图标，可以直接与我们客服人员对话，愿我们今后的合作愉快！)