依托改造后的根癌农杆菌Ti质粒T-DNA转移系统，去除质粒致瘤基因，构建安全的二元载体、三元载体系统。将目的基因与筛选标记基因插入T-DNA区域，在农杆菌Vir毒蛋白的诱导作用下，T-DNA切割、转移并整合至水稻细胞核基因组，实现外源基因的稳定插入与表达。常用农杆菌菌株为EHA105、AGL-1，适配水稻愈伤组织侵染体系。适用受体材料受体为水稻成熟种子诱导的胚性愈伤组织，材料获取不受季节、生育期限制，可全年开展转化实验；其次可选用水稻幼胚、幼穗诱导愈伤，再生能力更强，但取材受限。粳稻愈伤诱导与再生效率显著优于籼稻，籼稻是目前水稻转化的主要难点材料。抗性筛选与植株再生共培养结束后，将幼胚转移至含筛选压力的培养基上，分批筛选抗性愈伤组织，淘汰未转化的阴性细胞；将阳性抗性愈伤转入分化培养基，诱导芽体分化，再转入生根培养基培育完整幼苗；炼苗后移栽至温室培养，获得T0代植株。分子鉴定与纯合株系筛选对T0代植株提取DNA，通过PCR、Southern杂交检测外源基因整合情况，通过RT-PCR、Westernblot检测基因表达水平；收获T1代种子后，小麦基因转化，连续多代自交，结合分子检测筛选获得遗传稳定的纯合株系。农杆菌侵染条件优化菌液OD值、侵染时间、共培养温度直接决定转化效率。菌液浓度过高、侵染过久会导致愈伤菌害褐化；浓度过低则侵染不完全、阳性率极低。标准体系下OD600取值0.6–0.8，侵染10–20分钟，25℃避光共培养为优条件。组培体系细节调控愈伤诱导阶段依靠2，4-D维持胚性状态；分化阶段调整细胞分裂素与生长素配比，促进芽苗分化；筛选剂浓度需提前预实验确定，浓度过高阳性愈伤，过低会出现假阳性植株；同时需严格控制无菌环境，杂菌与真菌污染。小麦基因转化-贝科新肽(推荐商家)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。行路致远，砥砺前行。武汉贝科新肽科技有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，更矢志成为化学试剂具有竞争力的企业，与您一起飞跃，共同成功!)