酶免疫斑点试验原理酶免疫斑点试验原理将细胞置于包被有特异性Antibody的96孔板中培养，在有刺激的条件下，细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被Antibody捕获。移除细胞后，被capture的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识，其后再与酶标记的亲和素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞会留下直径大小不等的stainedspots。1.加入细胞到含有（或不含）刺激物中培养；2.阳性细胞开始分泌细胞因子，细胞因子就近被包被Antibody捕获；3.移出细胞，清洗板子，加入生物素标记的检测Antibody，形成“Antibody-抗原-Antibody”夹心结构；4.为了观察膜上斑点的形成，加入酶标记的亲和素；5.加入显色底物，在酶的催化分解下，生成不可溶的色素，就近沉淀在局部的膜上形成斑点；6.斑点计数（可用bioreader自动读板仪计数），数据处理，结果分析。酶免疫斑点试验（ELISPOT）的原理是什么呢酶免疫斑点试验（ELISPOT）的原理是什么呢（一）原理：细胞受到刺激后局部产生细胞因子，被PVDF膜上特异性单cloneAntibody捕获。细胞分解后，再与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。（二）ELISPOT与ELISA的区别1.ELISA通过显色反应，在Microplatereader上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。2.ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，酶免疫斑点试验厂家，可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。3.由于是单细胞水平检测，酶免疫斑点试验，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从20万～30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxinMcAb，在研究者以刺激剂activation细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。T细胞的ELISpot分析应用：ELISpot是研究特异性免疫反应的敏感方法，能够区分活化的T细胞亚群。例如，Th1细胞产生干扰素-γ、IL-2和TNF-α，而Th2细胞产生其他细胞因子，如IL-4、IL-5和IL-13。例如，酶免疫斑点试验生产厂家，这被广泛应用于infectiousdisease、cancer、过敏和自身免疫性疾病的研究。在vaccine研究中，ELISpot是一种标准工具，用于通过测量激发强大T细胞反应的能力(通常是干扰素-γ的分泌)来确定vaccine的有效性。基于ELISpot的诊断分析已经可用，包括一种通过测量T细胞对tuberculosis分枝Bacillus特定抗原的反应分泌干扰素-γ来检测tuberculosis病感染患者的测试。酶免疫斑点试验-酶免疫斑点试验厂家-世联博研(推荐商家)由世联博研（北京）科技有限公司提供。世联博研（北京）科技有限公司拥有很好的服务与产品，不断地受到新老用户及业内人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员，点击页面的商盟客服图标，可以直接与我们客服人员对话，愿我们今后的合作愉快！)