贝科新肽科技公司(多图)-荧光原位杂交
这一原理对于检测一个特异的mRNA在某一种生物体,或者某些组织切片、单个细胞里具体表达位置非常有用。该技术早应用于60年代末期,由于核酸分子杂交的特异性高,并可定位,因此该技术已被广泛应用,例如与细胞内RNA进行杂交以观察该组织细胞中特定基因表达水平。原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其他成分的影响,因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内DNA或RNA研究更为方便;同时由于原位杂交不需要从组织中提取核酸,对于组织中含量极低的靶序列有极高的敏感性,并可完整地保持组织与细胞的形态,更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜(1)在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/LNaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,荧光原位杂交,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。(2)用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/LNaOH重复步骤(1)。(3)吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/LTris·Cl(pH7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。(4)吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/LNaCl、0.5mol/LTris·Cl(pH7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。(5)将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定DNA。(6)将固定在膜上的DNA与32P标记的RNA进行杂交。核酸原位杂交可根据其检测物而分为细胞内原位杂交和组织切片内原位杂交;根据其所用探针及所要检测核酸的不同又可分为DNA-DNA,RNA-DNA,RNA-RNA杂交。但不论哪种杂交都必须经过组织细胞的固定,预杂交,杂交,冲等一系列洗步骤及自显影或酶法显色以显示杂交结果。我们在这儿介绍的是整胚原位杂交,不同于一般的在载片上对细胞和组织切片进行探针杂交及检测的原位杂交,贝科新肽科技公司(多图)-荧光原位杂交由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司实力不俗,信誉可靠,在湖北武汉的化学试剂等行业积累了大批忠诚的客户。贝科新肽带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌,共创美好未来!)
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