武汉贝科新肽-荧光原位杂交
而是对完整的斑马鱼胚胎进行探针杂交及检测,从整体上把握探针的结合部位,然后对胚胎进行切片,以确定探针结合的具体位置。整胚原位杂交在斑马鱼分子生物学研究中是一种非常重要的实验方法,荧光原位杂交,原位杂交的探针可以是同位素的探针,用自显影来检测;也可以是非同位素的探针,通过荧光或酶法予以检测。我们这儿所介绍的一种原位杂交的方法是通过后者,以标记探针,然后用酶联的方法进行检测。菌落的裂解及DNA结合于纤维素滤膜(1)在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/LNaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上,将滤膜放到小洼上,展平保鲜膜,使滤膜均匀湿润,让滤膜留于原处2-3分钟。(2)用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜,用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/LNaOH重复步骤(1)。(3)吸干滤膜,将滤膜转移到新的带有1mol/LTris·Cl(pH7.4)的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜,再重复一次该步骤。(4)吸干滤膜,把它转移到有1.5mol/LNaCl、0.5mol/LTris·Cl(pH7.4)的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜,转移到一张干的滤纸上,置于室温20-30分钟,使滤膜干燥。(5)将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃干烤2小时,固定DNA。(6)将固定在膜上的DNA与32P标记的RNA进行杂交。把滤膜放在纸巾上于室温晾干后,把滤膜(编号面朝上)放在一张保鲜膜上,并在保鲜膜上作几个不对称的标记,以使滤膜与性自显影片位置对应。用第二张保鲜膜盖住滤膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小时。底片显影后,在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置,同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸,通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定阳性菌落。武汉贝科新肽-荧光原位杂交由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司实力不俗,信誉可靠,在湖北武汉的化学试剂等行业积累了大批忠诚的客户。贝科新肽带着精益求精的工作态度和不断的完善创新理念和您携手步入辉煌,共创美好未来!)