原位杂交-武汉贝科新肽科技公司-染色体原位杂交
生物领域应用原位杂交技术的例子:基因表达和调控研究:原位杂交技术可以用于研究基因表达的调控机制。例如,可以标记特定基因的探针,植物原位杂交,检测该基因在不同环境、不同生长条件下的表达情况,进而研究其表达调控机制。细胞分化与发育研究:在细胞分化与发育研究中,原位杂交技术常被用于检测和定位特定基因的表达情况,进而了解细胞分化的过程和机制。例如,可以标记与细胞分化相关的基因探针,检测该基因在不同组织、不同发育阶段的表达情况。在ISHH,整个实验周期是比较长的,实验程序也比较繁杂,而杂交在ISHH整个实验中可被认为是“短兵相接”的一步。杂交前的一切准备工作如增加组织通透性都是为了在杂交这一步骤中核酸探针能进入细胞或组织与其内的靶核苷酸相结合。因此,杂交是ISHH中关键的而且是重要的一个环节。杂交是将杂交液滴于切片组织上,加盖硅化的盖玻片,原位杂交,防止孵育过程中的高温(50℃左右)导致杂交液的蒸发。为保证杂交所需的湿润环境,可将其放在盛有少量5×SSC或2×SSC(standardsalinecitrate,SSC)溶液的硬塑料盒中进行孵育。杂交液的成分和预杂交液基本相同,所不同的是加入了标记的核酸探针和硫酸葡聚糖。以菌落原位杂交为例:对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行筛选时,可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。将少数菌落转移到纤维素滤膜上(1)在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。(2)用无菌牙签将各个菌落先转移至滤膜上,再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种(或打点)。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后,荧光原位杂交,在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。(3)倒置平板,染色体原位杂交,于37℃培养至划线的细菌菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。(4)用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂,在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。(5)用Parafilm膜封好主平板,倒置贮放于4℃,直至获得杂交反应的结果。(6)裂解细菌,按本段下面所述方法,使释放的DNA结合于纤维素滤膜。原位杂交-武汉贝科新肽科技公司-染色体原位杂交由武汉贝科新肽科技有限公司提供。原位杂交-武汉贝科新肽科技公司-染色体原位杂交是武汉贝科新肽科技有限公司今年新升级推出的,以上图片仅供参考,请您拨打本页面或图片上的联系电话,索取联系人:夏先生。)
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