济南金泉化工-蛋白还原酶tcep厂家
TCEP溶液,0.5M5mL操作步骤对于培养细胞样品:1.融解RIPA裂解液,徐州蛋白还原酶tcep,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM。2.裂解细胞2.1对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无培养液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。2.2对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。3.充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和沉淀等操作。注意:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,蛋白还原酶tcep生产厂家,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。TCEP溶液,0.5M(一)、煮沸法1、将1.5ml培养液倒入eppendorf管中,4℃下12000g离心30秒。2、弃上清,将管倒置于卫生纸上几分钟,使液体流尽。3、将菌体沉淀悬浮于120mlSTET溶液中,涡旋混匀。4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml),涡旋振荡3秒钟。5、将eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。6、用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。8、取20ml进行电泳检查。TCEP溶液,0.5M(TCEPSolution)操作步骤(一)获得目的基因1、通过PCR方法:以含目的基因的质粒为模板,蛋白还原酶tcep哪家好,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。(二)构建重组表达载体1、TCEP溶液,0.5M(TCEPSolution)载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,蛋白还原酶tcep厂家,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。济南金泉化工-蛋白还原酶tcep厂家由济南金泉化工有限公司提供。“托尔油,七钼酸铵,二聚酸,山梨醇,聚磷酸铵”选择济南金泉化工有限公司,公司位于:济南市商河县龙桑寺镇长安工业园,多年来,济南金泉化工坚持为客户提供好的服务,联系人:姜经理。欢迎广大新老客户来电,来函,亲临指导,洽谈业务。济南金泉化工期待成为您的长期合作伙伴!)